RT-PCR Mix for qPCR（預(yù)混型逆轉(zhuǎn)錄試劑盒）
貨號：R1031 ??規(guī)格：100次（20?μl反應(yīng)體系）
?
產(chǎn)品說明
RT-PCR Mix for qPCR是預(yù)混型逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒，操作簡便，可快速高效完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。其中Enzyme Mix含有高效逆轉(zhuǎn)錄酶和熱敏型DNase，一步完成基因組DNA的清除以及RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，RT Buffer包含逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的其他組分，無需分步多次加樣，降低了樣品污染的風(fēng)險。同時，本試劑盒配備了Control Mix，用于陰性對照反應(yīng)，檢驗RNA模板中是否有基因組DNA殘留。本試劑盒的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物對染料法和探針法熒光定量PCR反應(yīng)均有很好的兼容性，可進行精準(zhǔn)的基因表達分析。
?
產(chǎn)品組分
|
組分 |
R1031（100次） |
|
Enzyme Mix |
100 μl |
|
5X RT Buffer |
400?μl |
|
Control Mix |
20 μl |
|
RNase-free ddH2O |
1 ml?×?2 |
?
保存條件
各組分均-20℃保存，并避免反復(fù)凍融。
?
適用范圍
第一鏈cDNA?合成
?
注意事項
l?本品含有熱敏型DNase，請于冰上使用本品各組分。
l?為保證成分均勻，請將Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分別瞬時離心、吹打混勻后再吸取使用。
l?在操作過程中，注意防止引入RNase導(dǎo)致RNA降解。RNA最好保存于-70℃，避免反復(fù)凍融。
l?cDNA產(chǎn)物應(yīng)置于-20℃或以下保存，避免反復(fù)凍融。
?
操作步驟
1.?配制反應(yīng)體系
按以下體系，在冰浴的無菌無酶離心管中配制反應(yīng)混合液：
|
組分 |
用量 |
|
5X RT Buffer |
4?μl |
|
Enzyme Mix |
1?μl |
|
RNA |
1pg-1μg |
|
RNase-free ddH2O |
補足至20?μl? |
?
陰性對照反應(yīng)（可選）
即不加逆轉(zhuǎn)錄酶的反應(yīng)，產(chǎn)物用于在qPCR中作為陰性對照，檢驗?zāi)０錜NA中是否有基因組DNA殘留
按以下體系，在冰浴的無菌無酶離心管中配制反應(yīng)混合液：
|
組分 |
用量 |
|
5X RT Buffer ? |
4?μl |
|
Control Mix |
1?μl |
|
RNA |
1pg-1μg |
|
RNase-free ddH2O |
補足至20?μl? |
?
2.?進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
將上述混合液吹打混勻，瞬時離心收集至管底。按以下程序，在PCR儀中進行反應(yīng)：
|
溫度 |
時間 |
|
50℃ |
15 min |
|
85℃ |
5 sec |
?
3. qPCR反應(yīng)及cDNA保存
cDNA產(chǎn)物可稀釋后立即進行染料法或探針法qPCR反應(yīng)。若使用未稀釋的cDNA原液，則體積不能超過反應(yīng)體系的1/10，以避免抑制反應(yīng)效率。長期保存cDNA產(chǎn)物應(yīng)于-20℃或以下環(huán)境中，并避免反復(fù)凍融。
?