Optimus? Hotstart?Taq?Mix

Cat. #：P2041，P2042，P2043，P2044

產(chǎn)品簡介

Optimus? Hotstart?Taq?Mix是2×濃縮的PCR擴增預(yù)混和溶液，含有Hotstart?Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等PCR擴增必需組分（模板與引物除外）。使用時，僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行PCR，大大簡化操作過程，縮短操作時間，降低污染（加樣次數(shù)減少）同時，由于體系內(nèi)含有增強劑，能夠顯著增強PCR擴增的靈敏度。擴增產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可直接用于TA克隆。

Optimus? Hotstart?Taq DNA聚合酶是一種創(chuàng)新型的類抗體技術(shù)修飾熱啟動酶，該酶在室溫下活性被完全封閉，依賴溫度激活酶活性，可有效減少非特異性擴增，具有非常高的特異性。擴增片段長度可達5 kb（簡單模板）。延伸速率為2min/kb（70-75℃，簡單模板可達20s/kb）。該酶具有5'→3'聚合酶活性，無3'→5'外切酶活性。擴增產(chǎn)物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先進的生產(chǎn)技術(shù)，動物源性DNA污染為零，穩(wěn)定性更強，具有抗體法熱啟動酶不可比擬的優(yōu)勢。同時，預(yù)變性時間縮短至3分鐘，工作效率比大多數(shù)化學(xué)修飾法熱啟動酶更高，是一款非常新穎、實用的產(chǎn)品。

產(chǎn)品組成

本產(chǎn)品分含體系中包含溴酚藍、不含溴酚藍兩類。體系中包含溴酚藍的產(chǎn)品，PCR擴增產(chǎn)物可直接電泳檢測。這兩類產(chǎn)品的擴增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍的包裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質(zhì)量控制

純度檢測：經(jīng)質(zhì)量檢測，產(chǎn)品不含脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應(yīng)用舉例

1.?配制反應(yīng)體系

請于冰上配置反應(yīng)體系，體系大小與組分用量與添加順序可調(diào)整：

[1]?引物終濃度建議范圍：0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度，效率低時可提高濃度。

[2]?不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建議用量如下表（50 μl反應(yīng)體系）。

[3]?可單獨訂購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[4]?可單獨訂購25mM?MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2.?設(shè)定反應(yīng)程序進行PCR反應(yīng)

[1]?退火溫度應(yīng)根據(jù)Tm值較低的引物來設(shè)。

[2]?延伸時間按2min/kb來設(shè)最佳（簡單模板可達20s/kb）。

3.?分析結(jié)果

反應(yīng)產(chǎn)物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設(shè)備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要，可進行割膠回收。

無產(chǎn)物或產(chǎn)物量少的改進措施有：1調(diào)整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1:?10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高產(chǎn)量。

操作注意事項

1?本產(chǎn)品采用改進的類抗體修飾技術(shù)，依賴溫度激活DNA聚合酶，能有效抑制非特異性結(jié)合，可在室溫下配置反應(yīng)體系。

2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，因此在PCR產(chǎn)物3'末端通常會加上1個多余的脫氧腺嘌呤核苷，可直接用于TA克隆。

引物設(shè)計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間；上下游引物3’末端避免互補，避免出現(xiàn)3個以上重復(fù)的G或C，或出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)，否則會產(chǎn)生非特異性擴增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量盡量接近；Tm值控制在55-65℃之間，且上下游引物Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點、修飾等）是非模板匹配序列，不參與Tm值計算。

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